-
قابل دانلود از شنبه, ۱۲ تیر ۱۴۰۰
راهنمای فارسی استخراج DNA ژنومیک از باکتری
تکنیک‌های مختلف زیادی برای استخراج دی‌ان‌ای ژنومی از سلول‌های باکتریایی وجود دارد که تمامی آن‌ها شامل مراحل مشترکی هستند یعنی:
شکستن سلول، حذف پروتئین‌ها و آزادسازی مواد ژنتیکی.
هدف اولیه از این آزمایش، استخراج و به دست آوردن دی‌ان‌ای باکیفیت است که بتوان آن را برای چندین سال در شرایط مناسب نگهداری کرد. مراحل اصلی در جداسازی دی‌ان‌ای شامل لیز کردن سلول‌ها و سپس حذف پروتئین‌ها، کربوهیدرات‌ها، آران‌ای و غیره است. حذف و شکستن دیواره سلولی و غشای سلولی معمولاً به وسیله ترکیب مناسب و بهینه‌ای از آنزیم‌ها برای هضم دیواره سلولی ( معمولاً لیزوزیم) و دترجنت‌ها برای حذف غشا انجام می گیرد. رایج‌ترین دترجنت یونی مورد استفاده در این مرحله سدیم دود سیل سولفات (SDS) هست. آر ان ای معمولاً به وسیله افزودن RNase عاری از DNase شکسته میشود. الیگوریبونوکلئوتیدهای حاصل، براساس قابلیت حلالیت آن‌ها در حلال‌های غیر قطبی (معمولاً الکل/آب) از دی‌ان‌ای با وزن مولکولی بالا جدا می‌شوند. پروتئین‌ها تحت دناتورا سیون شیمیایی و یا تجزیه آنزیمی قرار می‌گیرند که این کار با افزودن Proteinase-K انجام میشود. رایج‌ترین تکنیک برای حذف پروتئین‌ها شامل دناتوراسیون و استخراج به فاز آلی به واسطه فنل و کلروفرم انجام میشود.
در این پروتکل اجزا و واکنشگرهای لازم برای انجام آزمایش معرفی شده و نقش آن‌ها در انجام واکنش و آزمایش از نظر شیمیایی و بیولوژیک با جزئیات و به‌تفصیل شرح داده میشود.
فهرست مطالب
| مقدمه | 2 |
| واکنشگرهای لازم و نقش آن‌ها | 3 |
| -لوریا برتانی براث | 3 |
| -بافر Tris EDTA | 3 |
| -سدیم دود سیل سولفات (SDS) | 4 |
| -پروتئیناز-K | 4 |
| -محلول نمکی NaCl | 4 |
| -ستیل تری متیل آمونیوم بروماید (CTAB) | 4 |
| -فنل:کلروفرم:ایزوامیل‌الکل | 4 |
| -ایزوپروپانول | 5 |
| روش انجام | 5 |
| ملاحظات | 6 |
| موارد احتیاط | 7 |
| رفع مشکلات احتمالی در مسیر انجام این پروتکل | 8 |
| فلوچارت خلاصه مراحل انجام این پروتکل | 9 |
| عنوان: |
راهنمای فارسی استخراج DNA ژنومیک از باکتری |
| نام فایل: | 528-Isolation of Genomic DNA.pdf |
| ایجاد کننده: | ژن پروتکل |
| زبان: | فارسی |
| سال انتشار: | 1400 |
| نوع سند: | پروتکل آزمایشگاهی |
| فرمت: | |
| حجم فایل: | 486 کیلوبایت |
| تعداد صفحات: | 10 |
پرداخت و دانلود از طریق لینک زیر
تمامی درگاه های پرداخت ژنـ پروتکل توسط شرکت دانش بنیان نکست پی پشتیبانی می شود. نکست پی دارای مجوز رسمی پرداختیاری به شماره 1971/ص/98 ، از شرکت شاپرک و بانک مرکزی جمهوری اسلامی ایران و دارای نماد اعتماد در حوزه (متمرکزکنندگان پرداخت) از مرکز توسعه تجارت الکترونیکی وزارت صنعت معدن و تجارت است.
