پروتکل استخراج سریع میکرو RNA از خون و سلول های محیط رشد

این پروتکل، استخراج سریع کل RNA شامل RNAهای کوچک را با استفاده از روش استخراج قدرتمند گوانیدین ایزوتیوسیانات-فنل:کلروفرم تشریح می کند. شرایط استخراج موجب می شود پروتئین ها و DNA در لایه ارگانیک (لایه وسط یا اینترفاز) محلول دو فازی قرار بگیرند و RNA که باقی مانده در لایه آبی بالا قرار بگیرد. فاز آبی (aqueous phase) به یک لوله دیگر منتقل می شود و RNA بوسیله مقدار برابر از ایزوپروپانول رسوب می کند. با این روش می توان مقادیر بالایی از RNA کل خالص و سالم را حتی از مقادیر بسیار کمی سلول یا بافت بدست آورد. بواسطه سادگی کار این روش، امکان استخراج از تعداد زیادی نمونه به طور همزمان وجود دارد.

فهرست مطالب

مقدمه............ 2

مواد و وسایل لازم............ 2

نگاهی گذرا به این پروتکل............ 3

جزئیات پروتکل............ 4

جداسازی RNA از نمونه های خون............ 7

استخراج RNA از سلول های رشد یافته در محیط رشد............ 7

سلول های بهم چسبیده............ 7

لیز کردن مستقیم سلول های بهم چسبیده در دیش کشت............ 7

جمع آوری سلولهای بهم چسبیده با روش تریپسین............ 8

سلولهای رشد یافته در محیط سوسپانسیون............ 8

تعیین کمیت RNA بوسیله اسپکتروفتومتری............  11